HPLC untuk Uji Hidrokuinon: Bagaimana Laboratorium Dalam Menentukan Konsentrasinya?

Hidrokuinon merupakan senyawa kimia yang dikenal karena kemampuannya menghambat pembentukan melanin, yaitu pigmen yang memberikan warna pada kulit. Namun, untuk mengetahui keberadaan dan jumlah hidrokuinon dalam suatu produk, pengamatan fisik saja tidak cukup.

Diperlukan uji hidrokuinon di laboratorium untuk mengidentifikasi senyawa dan menentukan konsentrasinya secara kuantitatif. Salah satu metode yang dapat digunakan adalah High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

Daftar Isi:

• Mengenal Hidrokuinon dan Pentingnya Pengujian Kadar dalam Produk
• HPLC untuk Analisis Hidrokuinon?
• Bagaimana Cara Kerja HPLC dalam Mengukur Kadar Hidrokuinon?

Mengenal Uji Hidrokuinon dan Pentingnya Pengujian Kadar dalam Produk

Uji hidrokuinon di laboratorium diperlukan untuk mengetahui berapa banyak senyawa tersebut yang terkandung dalam suatu sampel. Informasi ini dapat mendukung pengendalian mutu, pemeriksaan kesesuaian terhadap spesifikasi, serta evaluasi kandungan bahan dalam produk.

Uji Hidrokuinon juga membantu memperoleh data kuantitatif yang tidak dapat dipastikan hanya melalui warna, aroma, tekstur, atau klaim pada label produk. Penting untuk membedakan pengujian kualitatif dan kuantitatif.

Analisis kualitatif bertujuan mengetahui apakah suatu senyawa teridentifikasi dalam sampel, sedangkan analisis kuantitatif digunakan untuk menentukan jumlah atau konsentrasinya. Dalam konteks uji hidrokuinon, metode analisis yang sesuai perlu mampu memisahkan senyawa target dari komponen lain dan menghasilkan pengukuran yang dapat dipertanggungjawabkan.

Baca Juga:
Uji Lab Kosmetik: Mengapa Penting di Tengah Temuan 2,1 Juta Produk Tidak Memenuhi Ketentuan?

HPLC untuk Analisis Hidrokuinon?

Dalam uji hidrokuinon, sistem HPLC dapat dipasangkan dengan detektor ultraviolet (UV) atau diode array detector (DAD). Detektor tersebut mengukur respons berdasarkan penyerapan radiasi ultraviolet oleh senyawa yang keluar dari kolom.

Pemilihan kolom, komposisi fase gerak, panjang gelombang, dan kondisi analisis lainnya harus disesuaikan dengan karakteristik sampel serta dibuktikan kesesuaiannya melalui pengembangan atau verifikasi metode. Keunggulan HPLC adalah kemampuannya menghasilkan pemisahan kromatografi yang dapat digunakan untuk analisis kuantitatif.

Namun, hasil yang akurat tidak hanya bergantung pada instrumen. Preparasi sampel, kesesuaian metode, kalibrasi, selektivitas, dan pengendalian mutu juga berperan penting dalam menentukan keandalan hasil pengujian.

Bagaimana Cara Kerja HPLC dalam Mengukur Kadar Hidrokuinon?

Proses uji hidrokuinon dengan HPLC dimulai ketika larutan sampel dimasukkan ke dalam sistem melalui injektor. Sampel kemudian dibawa oleh fase gerak melewati kolom kromatografi.

Di dalam kolom, hidrokuinon berinteraksi dengan fase diam dan fase gerak sehingga mengalami pemisahan dari komponen lain berdasarkan karakteristik interaksinya. Setelah terpisah, hidrokuinon keluar dari kolom dan melewati detektor.

Detektor merekam respons senyawa tersebut dan menghasilkan puncak pada kromatogram. Waktu ketika puncak muncul disebut waktu retensi, yang dapat digunakan sebagai salah satu petunjuk identifikasi dengan membandingkannya terhadap standar hidrokuinon pada kondisi analisis yang sama.

Selanjutnya, kadar hidrokuinon ditentukan dengan membandingkan respons sampel terhadap respons larutan standar yang konsentrasinya telah diketahui. Dalam analisis kuantitatif, luas puncak umumnya digunakan sebagai respons analitik untuk menghitung konsentrasi senyawa.

Sejumlah larutan standar dianalisis untuk membentuk kurva kalibrasi yang menggambarkan hubungan antara konsentrasi hidrokuinon dan respons instrumen.

Tahapan Uji Hidrokuinon di Laboratorium

Uji hidrokuinon dengan HPLC melibatkan beberapa tahapan yang saling berkaitan. Setiap tahap perlu dilakukan secara tepat agar hasil analisis dapat menggambarkan kandungan senyawa dalam sampel secara representatif.

1. Preparasi sampel

Sampel ditimbang atau diukur sesuai prosedur, kemudian dilarutkan atau diekstraksi menggunakan pelarut yang sesuai. Preparasi bertujuan memindahkan hidrokuinon dari matriks sampel ke dalam larutan yang dapat dianalisis menggunakan HPLC.

Kondisi ekstraksi perlu mempertimbangkan karakteristik produk agar analit tidak hilang atau mengalami perubahan selama penanganan.

2. Penyaringan dan pengenceran sampel

Larutan sampel dapat disaring menggunakan membran yang kompatibel untuk mengurangi partikel yang berpotensi mengganggu sistem kromatografi. Apabila konsentrasi sampel diperkirakan berada di luar rentang kalibrasi, pengenceran dapat dilakukan sesuai prosedur.

Kesesuaian membran dan efektivitas preparasi perlu dipastikan agar hidrokuinon tidak tertahan atau hilang secara signifikan selama proses tersebut.

3. Pembuatan larutan standar

Larutan standar hidrokuinon disiapkan pada beberapa tingkat konsentrasi yang diketahui. Larutan ini digunakan untuk membangun kurva kalibrasi dan menjadi pembanding dalam penentuan kadar sampel.

Standar dan sampel perlu dianalisis menggunakan kondisi yang sama agar respons instrumen dapat dibandingkan secara tepat.

4. Analisis menggunakan instrumen HPLC

Larutan standar dan sampel diinjeksi ke dalam sistem HPLC. Komponen sampel dipisahkan di dalam kolom, kemudian dideteksi untuk menghasilkan kromatogram.

Kondisi analisis harus memungkinkan puncak hidrokuinon terpisah secara memadai dari komponen lain yang berpotensi mengganggu pengukuran.

5. Evaluasi hasil dan perhitungan kadar

Kromatogram diperiksa untuk mengevaluasi waktu retensi, bentuk puncak, pemisahan, dan respons analitik. Setelah kesesuaian sistem dan kriteria penerimaan metode terpenuhi, respons sampel digunakan untuk menghitung konsentrasi melalui kurva kalibrasi.

Hasil kemudian dikoreksi menggunakan faktor pengenceran dan perhitungan berdasarkan bobot atau volume awal sampel jika diperlukan.

Jangan Biarkan Skincare Anda Ditarik BPOM Akibat Hidrokuinon Ilegal!

Reputasi brand Anda terlalu berharga untuk dipertaruhkan. Konsultasikan kendala formulasi Anda hari ini dan buktikan keamanan produk pencerah Anda dengan pengujian HPLC presisi tinggi di IML Testing and Research. Amankan izin edar dan hindari kerugian massal sekarang juga.

Author: Elmira
Editor: Lina

Daftar Pustaka 

Gimeno, P., Maggio, A.-F., Bancilhon, M., Lassu, N., Gornes, H., Brenier, C., & Lempereur, L. (2016). HPLC–UV method for the identification and screening of hydroquinone, ethers of hydroquinone and corticosteroids possibly used as skin-whitening agents in illicit cosmetic products. Journal of Chromatographic Science, 54(3), 343–352. https://doi.org/10.1093/chromsci/bmv147

International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use. (2023). ICH harmonised guideline: Validation of analytical procedures Q2(R2). https://www.ich.org/page/quality-guidelines

Lin, C.-H., Sheu, J.-Y., Wu, H.-L., & Huang, Y.-L. (2005). Determination of hydroquinone in cosmetic emulsion using microdialysis sampling coupled with high-performance liquid chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 38(3), 414–419. https://doi.org/10.1016/j.jpba.2005.01.031